Laboratorium 12 L I P I D Y
Ćwiczenie 1: Próba akroleinowa – wykrywanie glicerolu
Przygotuj dwie probówki: do pierwszej dodaj 5 kropli oleju, a do drugiej – 5 kropli glicerolu (próba kontrolna). Następnie do obu probówek dodaj po szczypcie krystalicznego KHSO4. U wylotu każdej probówki należy umieścić skrawek bibuły zwilżony nasyconym amoniakalnym roztworem wodorotlenku srebra. Obie probówki ogrzewaj nad palnikiem. Zaobserwuj wydzielający się zapach akroleiny oraz czernienie skrawków bibuły. Sformułuj wnioski.
Ćwiczenie 2: Wykrywanie nienasyconych kwasów tłuszczowych
Przygotuj dwie probówki: do jednej odmierz 2 mL 1% roztworu masła w chloroformie, a do drugiej – 2 mL 1% roztworu oleju w chloroformie. Następnie do obu probówek dodawaj porcjami (po 0,5 mL) 0,5% roztwór bromu w chloroformie, aż do otrzymania trwałego pomarańczowego (jednakowego w obu probówkach) koloru. Porównaj ilość mL roztworu bromu zużytego do każdej próby. Sformułuj wnioski.
Ćwiczenie 3: Rozpuszczalność lipidów
Do 4 probówek dodaj po 5 kropli oleju. Zbadaj rozpuszczalność oleju w różnych rozpuszczalnikach (woda, alkohol etylowy, chloroform, aceton) – dodając je do kolejnych probówek w ilości ok. 1 mL. Zwróć uwagę na różnicę gęstości właściwej oleju i użytych rozpuszczalników. Sformułuj wnioski.
Ćwiczenie 4: Otrzymywanie emulsji tłuszczu
Do dwóch probówek odmierz po 3 mL wody destylowanej i do każdej dodaj po 5 kropli oleju. Następnie do pierwszej probówki dodaj kroplę 20% roztworu żółci, a drugą pozostaw bez zmian (kontrola). Każdą probówkę wytrząsaj dokładnie przez co najmniej 30 sekund. Odczekaj 5 minut i zaobserwuj, która z emulsji nie jest trwała i dochodzi do rozdzielenia warstw. Sformułuj wnioski.
Ćwiczenie 5: Próba Kreisa na jełczenie aldehydowe
Przygotuj dwie probówki: do pierwszej dodaj 1 mL świeżego oleju, a do drugiej – 1 mL oleju zjełczałego. Do obu probówek wlej po 1 mL stężonego HCl i mocno wytrząsaj przez 1 minutę. Następnie dodaj po 1 mL 0,1% roztworu rezorcyny w benzenie, wytrząśnij ponownie i pozostaw do rozdzielenia się warstw. Czerwono-fioletowe zabarwienie warstwy kwasowej wskazuje na jełczenie aldehydowe.
Ćwiczenie 6: Oznaczanie stężenia trójglicerydów metodą enzymatyczną
Wykonaj zgodnie z załączoną instrukcją.
Ćwiczenie 7: Oznaczanie zawartości cholesterolu całkowitego metodą enzymatyczną
Ćwiczenie 8: Oznaczanie zawartości cholesterolu HDL metodą strąceniową
Ćwiczenie 9: Oznaczanie zawartości cholesterolu LDL
Korzystając z uzyskanych w ćwiczeniach 6 – 8 wyników analiz zawartości trójglicerydów (ctrójglicerydy), cholesterolu całkowitego (ccholesterol całkowity) oraz cholesterolu frakcji HDL (cHDL), oblicz ze wzoru Friedewalda zawartość cholesterolu frakcji LDL.
stężenie cholesterolu LDL [mg/dL] = ccholesterol całkowity – cHDL – ctrójglicerydy/5
stężenie cholesterolu LDL [mM] = ccholesterol całkowity – cHDL – ctrójglicerydy/2,2
Wzoru nie należy stosować u osób ze stężeniem trójglicerydów ponad 400 mg/dL.
que-hiciste