optymalizacja PCR.pdf

(194 KB) Pobierz
-łańcuchowa reakcja polimerazy
(polymerare
chain reaction)
W połowie lat 80 opracowano technikę,
służącą do amplifikacji (powielania)
dowolnej sekwencji DNA z użyciem pary
oligonukleotydowych
starterów
oraz
termostabilnej polimerazy DNA.
PCR przeprowadza się całkowicie in
vitro, bez wykorzystania komórek.
•
Denaturacja dwuniciowego DNA w
95
o
C
•
Przyłączenie startera do matrycy w
temperaturze ok.55
o
C
•
Polimeryzacja w
o
C
72
•
•
•
•
•
•
Matryca DNA lub RNA
Startery
Bufor
Substraty-dNTP
Jony Mg
2+
Termostabilna polimeraza DNA
KOMPONENTY
Woda dest. dejonizowana
STĘZENIE
ILOŚĆ NA 100
µ
l
MIESZANINY REAKCYJNEJ
Zmienna
10 × bufor
2 mM dNTP mix
Starter I
Starter II
Polimeraza Tag DNA
25 mM MgCl
2
Matrycowe DNA
1×
0,2 mM każdego
0,1-1
µM
0,1-1
µM
2u/100
µl
1-4 mM
10 pg-1
µg
10
µl
10
µl
zmienna
zmienna
zmienna
zmienna
zmienna

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika:

Zgłoś jeśli naruszono regulamin